在ELISA試劑盒實驗中，顯色與比色是萬萬不可疏忽的一個方面。在本月初時，研域(上海)化學(xué)試劑有限公司技術(shù)專員特別為2018年試劑盒的運用做出了總結(jié)與剖析。今天咱們首要針對ELISA顯示與比色，一同來看本年度ELISA試劑盒年底材料總結(jié)大放送。
ELISA經(jīng)過顯色反響，在酶標儀上測定吸光度，與規(guī)范曲線比較得出可溶性蛋白總量。ELISPOT也是經(jīng)過顯色反響，在細胞排泄這種可溶性蛋白的相應(yīng)方位上閃現(xiàn)明晰可辨的斑駁，可直接在顯微鏡下人工計數(shù)斑駁或經(jīng)過核算機輔佐的剖析系統(tǒng)對斑駁進行計數(shù)，1個斑駁代表1個細胞，然后核算出排泄該蛋白的細胞的頻率。由于是單細胞水平檢測，ELISPOT比ELISA更活絡(luò)，能從20萬-30萬細胞中檢出1個排泄該蛋白的細胞。捕獲抗體具有高親和力、高特異性、低內(nèi)毒素的單抗，在研究者以刺激劑激活細胞時，不會影響活化細胞排泄細胞因子。   
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，ELISA試劑盒然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗，需先將板置于規(guī)范96孔的座架中，才可進行比色。在加底物液顯色前，先將軟板邊際剪凈，這樣，此板就可*平妥坐入座架中。比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點，測讀底物孔和空白孔，以記載本次試驗的試劑情況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進行核算。
比色成果的表達以往通用光密度，現(xiàn)按規(guī)則用吸光度，兩者意義相同。一般的表明辦法是，將吸收波長寫于A字母的右下角。
相關(guān)問題剖析：
1. 酶結(jié)合物的稀釋液
在稀釋液中常參加高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)，ELISA試劑盒經(jīng)過競賽按捺酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸附。一般還參加可以按捺蛋白質(zhì)吸附于塑料外表的非離子型外表活性劑。
2. 正確稀釋酶結(jié)合物 
酶結(jié)合物的合適作業(yè)濃度需求經(jīng)過預(yù)試驗來確定，濃度過高易導(dǎo)致本底偏高，濃度過低則會導(dǎo)致陽性信號的削弱。酶結(jié)合物在運用前稀釋，稀釋后的酶結(jié)合物不宜長期保存，因為低濃度的酶結(jié)合物極易失活。